Source:狄光辉Author:admin Addtime:2025/03/20 Click:
RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。
本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液（强，无抑制剂），不含蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂，使用本裂解液时，用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。
使用说明
(一) 细胞样品
1. 融解RIPA裂解液（强，无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。或根据实验需要加入总体效果更佳的蛋白酶抑制剂混合物, 如检测磷酸化蛋白，还需加入磷酸酶抑制剂混合物。
2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105-1×106个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。
（二）组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液（强，无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM，或根据实验需要加入总体效果更佳的蛋白酶抑制剂混合物, 如检测磷酸化蛋白，还需加入磷酸酶抑制剂混合物。
3. 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
注意事项
需自备PMSF或总体效果更佳的蛋白酶抑制剂混合物、根据不同样本专用的蛋白酶抑制剂混合物, 如检测磷酸化蛋白，还需加入磷酸酶抑制剂混合物。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
用RIPA裂解液（强，无抑制剂）裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度。 由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
本产品仅作科研用途。
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
