非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒说明书

产品名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒
英文名称：African Swine Fever Virus (ASFV) Fluorescent PCR Detection Kit
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融
有效期：12个月

一、产品简介

本试剂盒用于检测非洲猪瘟病毒（ASFV）的特异性核酸序列，采用荧光定量PCR（qPCR）技术，具有高灵敏度、高特异性和快速检测的特点。适用于猪血液、组织、粪便等样本中非洲猪瘟病毒的检测。

二、检测原理

本试剂盒基于TaqMan探针法，通过特异性引物和荧光探针与目标基因结合，在PCR扩增过程中释放荧光信号，实时监测荧光强度变化，从而实现对非洲猪瘟病毒核酸的定量检测。

三、试剂盒组成

1. ASFV PCR反应液：包含dNTPs、MgCl₂、缓冲液等

2. ASFV引物探针混合液：特异性引物和荧光探针

3. 阳性对照：含ASFV目标片段的质粒DNA

4. 阴性对照：无核酸酶水

5. DNA提取试剂（可选）：用于样本核酸提取

四、样本处理

1. 样本类型：全血、血清、组织、粪便等

2. 核酸提取：使用配套DNA提取试剂或商业化核酸提取试剂盒，按照说明书操作。

3. 样本保存：提取的DNA应尽快检测，或-20℃保存。

五、检测步骤

1. 试剂准备：将试剂盒各组分解冻并混匀，短暂离心。

2. 反应体系配制（以20μL为例）：

   • ASFV PCR反应液：

   • ASFV引物探针混合液：

   • 模板DNA：

   • 无核酸酶水：

3. PCR程序设置：

   • 预变性：95℃, 5分钟

   • 扩增：95℃, 15秒 → 60℃, 45秒（40个循环）

4. 荧光信号采集：在60℃步骤采集荧光信号（FAM通道）。

六、结果分析

1. 阴性对照：无扩增曲线。

2. 阳性对照：出现典型扩增曲线，Ct值≤35。

3. 样本结果：

   • 阳性：出现扩增曲线且Ct值≤40。

   • 阴性：无扩增曲线或Ct值>40。

七、注意事项

1. 实验前请仔细阅读说明书，严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

2. 避免试剂反复冻融，使用前充分混匀。

3. 样本处理过程中避免交叉污染。

4. 本试剂盒仅用于体外检测，不可用于临床诊断。

八、局限性

1. 检测结果可能受样本质量、操作误差等因素影响。

2. 本试剂盒仅针对非洲猪瘟病毒核酸，不能区分病毒活性。

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