猪瘟病毒E0蛋白Elisa抗体检测试剂盒说明书
Source:狄光辉Author:admin Addtime:2025/03/21 Click:
猪瘟病毒E0蛋白ELISA抗体检测试剂盒说明书
产品名称：猪瘟病毒E0蛋白ELISA抗体检测试剂盒
英文名称：Classical Swine Fever Virus (CSFV) E0 Protein ELISA Antibody Detection Kit
储存条件：2-8℃保存，避免冷冻
有效期：12个月
一、产品简介
本试剂盒用于检测猪血清或血浆中猪瘟病毒（CSFV）E0蛋白特异性抗体的存在，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，具有高灵敏度、高特异性和操作简便的特点。适用于猪瘟病毒感染后的抗体筛查和流行病学调查。
二、检测原理
本试剂盒采用间接ELISA法。预包被的CSFV E0蛋白抗原与样本中的特异性抗体结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，通过底物显色反应，测定吸光度值（OD值），从而判断样本中是否存在CSFV E0蛋白抗体。
三、试剂盒组成
预包被板：96孔板，包被CSFV E0蛋白抗原
阳性对照：CSFV E0蛋白抗体阳性血清
阴性对照：CSFV E0蛋白抗体阴性血清
酶标二抗：HRP标记的抗猪IgG抗体
洗涤液：20×浓缩洗涤液，使用前稀释
底物液A/B：TMB显色液
终止液：2M硫酸溶液
样本稀释液：用于稀释血清样本
四、样本处理
样本类型：猪血清或血浆
样本采集：无菌采集全血，分离血清或血浆，避免溶血。
样本保存：2-8℃可保存7天，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
五、检测步骤
试剂准备：
洗涤液：用蒸馏水按1:20稀释。
样本稀释：血清样本按1:40用样本稀释液稀释。
加样：
分别加入100μL稀释后的样本、阳性对照和阴性对照至预包被板孔中。
设置空白孔（仅加样本稀释液）。
孵育：37℃孵育30分钟。
洗涤：弃去孔内液体，每孔加入300μL洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次。
加酶标二抗：每孔加入100μL酶标二抗，37℃孵育30分钟。
洗涤：同步骤4。
显色：每孔加入50μL底物液A和50μL底物液B，37℃避光孵育15分钟。
终止反应：每孔加入50μL终止液，轻轻混匀。
读数：在450nm波长下测定各孔OD值（参考波长630nm）。
六、结果分析
计算临界值（Cut-off值）：
临界值 = 阴性对照平均OD值 × 2.1
（若阴性对照OD值<0.05，按0.05计算）
结果判定：
阳性：样本OD值 ≥ 临界值
阴性：样本OD值 < 临界值
七、注意事项
实验前请仔细阅读说明书，严格按照操作步骤进行。
试剂使用前恢复至室温（20-25℃），避免反复冻融。
加样时避免气泡产生，孵育时封板膜需密封。
终止液为强酸，避免接触皮肤和眼睛。
本试剂盒仅用于体外检测，不可用于临床诊断。
八、局限性
检测结果可能受样本质量、操作误差等因素影响。
本试剂盒仅检测CSFV E0蛋白抗体，不能区分自然感染与疫苗接种产生的抗体。
