DNA提取笔记
Source:磁珠法核酸提取试Author:admin Addtime:2019/01/28 Click:
DNA提取主要有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法、CTAB法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有硅质材料、阴离子交换树脂等。
1.保证核酸一级结构的完整性；
2.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；
4.其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
* 生物组织
一.最好新鲜组织，若不能马上提取，应贮存-70℃或液氮
二.液氮冷冻敲碎研磨
三.组织匀浆法
四.液氮匀浆法
* 培养细胞
悬浮生长细胞：1500g离心，4℃10分种收集细胞
单层培养细胞：可用刮棒或胰酶消化后离心收集
* 血液样品
血液样品一.
血液抗凝易用柠檬酸抗凝液（ACD）：
柠檬酸0.48g；柠檬酸钠1.32g；右旋葡萄糖1.47g加H2O至100ml，每6ml新鲜血液加1mlACD液零度保存数天，-70度长期贮存。
下面给出经常使用的Qiagen DNA提取试剂盒（血液样本）的中文翻译版，大家可以参考使用：（使用前最好对照英文版的步骤看一下）
1. 将冻存的血样取出，放入37℃水浴中快速解冻；
2. 取15ml离心管，加入9ml RBC Lysis Solution;
3. 吸取3ml已解冻的血样加到离心管内，翻转混匀10下；
4. 室温放置5min, 期间至少翻转1下；
5. 3500r/min 离心 2min;
6. 将悬浮液小心倒去（离心管内剩下约200ul的残留液，内含白细胞团块）；
7. 剧烈高速涡旋残留液（使白细胞团块尽量完全散开）；
8. 加3ml Cell Lysis Solution, 剧烈高速涡旋至白细胞团块分散均匀（这一步可以放于37℃水浴中帮助分散均匀，也可以放于室温储存至少2年）；
9. 加15ul RNA酶，37℃水浴15min；
10. 放于冰上3min，进行快速冷却；
11. 加 1ml Protein Precipitation Solution，剧烈高速涡旋，使蛋白质充分沉淀；
12. 3500r/min 离心5min（如果沉淀不理想，可放于冰上5min再进行离心）；
13. 取新的一批15ml 离心管，加3ml 异丙醇
14. 小心倒入步骤12的上清液（防止蛋白质沉淀物也倒入其中）；轻轻翻转混合50下至DNA团块可见；
15. 3500r/min 离心3min，小心弃上清（防止DNA团块随液体丢失）；
16. 准备吸水纸，倒放离心管于吸水纸上，干燥5min；
17. 加3ml 70%乙醇，翻转清洗DNA；
18. 3500r/min离心1min，弃上清；
19. 再准备吸水纸，倒置离心管于纸上，尽可能吸干液体，干燥5~10min;
20. 加300ul DNA Hydration Solution 到离心管，中速涡旋5S；
21. 置DNA样品于65℃水浴1小时；
22. 室温过夜（第一天结束）；
23. 第二天，样品先轻轻中速涡旋，再快速离心，最后转入1.5ml EP管内；
24. 用Nanodrop进行DNA 浓度检测，-80℃冻存。
DNA提取试剂盒：www.ex-dna.com
