Source:羧基磁珠Author:admin Addtime:2018/12/11 Click:
非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒|非洲猪瘟提取专用磁珠
本试剂盒采用磁珠吸附DNA/RNA的方法达到快速纯化病毒DNA/RNA的目的。适合于从200 µl 体液(包括血浆，血清，腹水，组织研磨上清液，培养细胞上清液，脑脊髓液，尿液，脱落细胞悬浮液等)中提取高纯度的病毒DNA/RNA，用于 PCR/RT-PCR、Real-time PCR/Real-time RT-PCR 等分子生物学实验。
一、 试剂盒组成、贮存、稳定性
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Cat. No. |
AS102 |
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Kit size |
50 preps |
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裂解液AS |
15 ml |
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裂解液B |
1 tube |
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裂解液C |
200 µl |
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溶解液S |
1 ml |
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磁珠S |
500 µl |
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洗涤液AW |
25 ml |
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洗涤液SW |
25 ml |
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洗脱液S (nuclease-free) |
5 ml |
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Protocol Manual |
1 |
裂解液AS：裂解液，室温密闭贮存。
磁珠S：磁珠，室温密闭贮存。
裂解液B：保存冻干的蛋白酶 K 请置于 -20℃；使用溶解液S溶解后，可4℃贮存1个月，长时间请置于 -20℃，反复冻融不超过3次。
裂解液C：核酸助沉剂。
溶解液S： 蛋白酶 K 溶解液， 室温密闭贮存。
洗涤液AW：混合均匀，室温密闭贮存。
洗涤液SW：混合均匀，室温密闭贮存。
洗脱液S（nuclease-free）：洗脱液。无 DNA/RNA 酶活性，室温密闭贮存。
一、 注意事项
1) 病毒具有很强的感染能力，操作前必须准备好各种防御措施。
2) 严格按操作步骤进行，废物必须放入含消毒液的废物缸，以免污染实验室和工作人员。
3) 使用不含DNA和RNA酶的离心管、吸管、Tip头、试剂和手套，工作人员戴口罩进行操作。
4) 如果裂解液AS 出现浑浊或者沉淀，将其置于37-56℃孵育至澄清。
5) 裂解液AS和洗涤液AW 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
二、 实验准备
1) 第一次使用时,将裂解液B用550 µl溶解液S充分溶解。
※ 裂解液B长期放置会有固体析出，但不影响提取效果，每次使用前一定要充分混匀。
2) 准备异丙醇(分析纯，无菌无RNase污染)30 ml和无水乙醇(分析纯，无菌无RNase污染)。
3) 磁力架。
4) 如果提取的是病毒RNA，请选用RNase free Tip头和1.5 ml离心管或将Tip头和1.5 ml离心管用 0.1% DEPC水处理后再使用，以避免纯化过程中病毒RNA被RNase降解。
三、 操作步骤
珠，直至分布均匀。
1) 将EP管置于磁力架上，静置至磁珠全部吸附至管壁，吸弃管内液体。
2) 打开管盖，让磁珠在安全柜中干燥2分钟。
※ 注意在磁力架上操作，勿从磁力架上取出离心管。
※ 此步骤建议在安全柜中操作。
1) 移去磁力架，加入50-100 µl洗脱液S（nuclease-free）或去离子水，用移液器吸头轻柔吹打管壁磁珠，直至分布均匀，缓慢抽吸混匀，56℃水浴5-10 min。
※ 56℃水浴可提高核酸洗脱效率。
2) 将EP管置于磁力架上，静置至磁珠全部吸附至管壁，吸取上清至一新的EP管(无菌无RNase污染），即得到样本的DNA/RNA。
五、 常见问题及处理建议
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常见问题 |
可能的原因 |
建议 |
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得率低 |
取样前没有充分混匀样品 |
每次取样前充分混匀样品，使白细胞均匀的悬浮于样品中 |
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裂解不充分 |
减少样品用量，或延长裂解时间 |
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样品中病毒含量太低 |
增大样本量或浓缩样本，其他试剂用量需根据实验情况适当调整 |
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样品用量大于说明书给出量 |
严格按照说明书操作 |
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无扩增条带或扩增条带不亮 |
用双蒸水代替洗脱液S，但没有调节pH |
用Tris将双蒸水pH调至8，代替洗脱液S |
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乙醇残留 |
延长晾干时间 |
以下操作步骤是从200 µl血清中提取病毒DNA/RNA 为例，从其他体积的样品中提取病毒核酸可按比例加裂解液AS、裂解液B和异丙醇，后续步骤中试剂的用量不变。
1) 在1.5 ml EP管中加入10 µl裂解液B和4µl裂解液C。
2) 加入200 µl 样品。
※ 如果样品不足200 µl,补加无菌生理盐水至200 µl。
3) 加入300 µl裂解液AS，漩涡振荡混合均匀，56℃水浴10分钟。
4) 将EP管从温育设备中取出，加入振荡混匀的磁珠S 10 µl，加入异丙醇300 µl（自备）室温下颠倒混5分钟。然后将EP管置于磁力架上进行磁分离，静置至磁珠全部吸附至管壁，吸弃管内液体。
5) 移去磁力架，加入500 µl 洗涤液AW，用移液器吸头轻柔吹打管壁磁珠，直至分布均匀。
6) 将EP管置于磁力架上，静置至磁珠全部吸附至管壁，吸弃管内液体。
7) 移去磁力架，加入500 µl 洗涤液SW，用移液器吸头轻柔吹打管壁磁
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