Source:DNA提取试剂盒Author:admin Addtime:2019/02/22 Click:
储存条件：
15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可 2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放 间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
注意事项:
．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
操作步骤
GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
处理材料
用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织，体积约两个绿豆大小，放入DNAase-free 的1.5ml EP中。向EP管中加入等体积的磁珠，以及加入200 μl缓冲液GA，振5mins/次，共3次。每破碎一次，需将含组织的EP管放入使其在下次破碎时更好的接触。可根据观察匀浆的>2mm的组织块。
如果需要去除RNA，需加入4 μl RNaseA需加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：），振荡15 sec，室温放置5 min。
加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，56℃放置1~3 h，直至组织溶解，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。放10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。将上清EP管中。
加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取量少和提取出的DNA不纯。
加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， ×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， ×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
重复操作步骤。
将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸 CB3置于室温放置5mins，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后PCR等）实验。
将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μ100ul）洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3
室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min。
50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低 7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
溶解的DNA样品其 A260/280 比值< 1.7 ~ 1.9。将DNA溶液放入-20°C冰箱 若要长期保存DNA样本，最好加入相应2.5倍体积的无水乙醇来沉淀DNA。混匀后-80℃低温冰箱中保存至少一年。
若需使用，需在7000~8000×g的离心机中离心5min，使DNA重新沉淀，再加入TEDNA沉淀。必要时须重新检测DNA的纯度和浓度。
纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260
0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在。
OD260/OD280比值应接近1.80，若R值大于1.8。说明存在RNA，可重新用处理。若R值小于1.8，则说明有蛋白质等杂质存在，需再用蛋白酶K、SDS及DNA进行纯化（也可加入1/8体积的3M NaAc(pH5.2)与冷乙醇
DNA沉淀析出。
比值在1.8-2.0时，认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可RNA的命运。当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。
组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）说明书：www.ex-dna.com
